Miha
核酸的结构与功能
1、核酸的基本组成单位和核酸的水解产物
核酸是以核苷酸(nucleotide)为基本组成单位的生物大分子,携带和传递遗传信息。核酸的水解产物是磷酸、戊糖和碱基。
2、核酸分子中核苷酸的连接方式:
核苷酸之间通过3',5'-磷酸二酯键相连,构成多聚核苷酸链。
3、DNA和RNA的一级结构和基本组成单位
核酸的一级结构是核苷酸的排列顺序。DNA的基本组成单位是脱氧核糖核苷酸,RNA的基本组成单位是核糖核苷酸
4、DNA二级结构——双螺旋结构的特点:
4. 碱基对的疏水作用力和氢键共同维持着DNA双螺旋结构的稳定。A=T,C=G/模型要点:两条反向平行,右手螺旋,双螺旋结构直径2.4nm,螺距3.45nm
5、基因和基因组的概念
基因(gene):指携带遗传信息的DNA区段,其中的核苷酸排列顺序决定了基因的功能。
基因组(genome):指生物体的所有编码RNA和蛋白质的序列及所有的非编码序列,即DNA的全部核苷酸序列。一个DNA分子可以看作是许多基因片段的集合。
6、mRNA、tRNA、rRNA的结构特点及功能:
6、mRNA:(hnRNA的前体)1. 真核生物mRNA的5'-端有帽结构。2. 3'-末端有多聚腺苷酸尾结构3. mRNA碱基序列决定蛋白质的氨基酸序列mRNA:1、3′末端为—CCA-OH 2、含10~20% 稀有碱基3、RNA二级结构呈“三叶草形”,三级结构为倒L型4.丰度最小,种类最多,大小各不相同,寿命最短,初级产物不均一。
7、/tRNA的反密码子能够识别mRNA密码子,具有很好的稳定性。/
8、rRNA:rRNA的结构为花状,细胞内含量最多,rRNA与核糖体蛋白结合组成核糖体(ribosome),为蛋白质的合成提供场所。rRNA单独存在不执行其功能。
7,沉降系数:S=10-13s是以分子量,分子形式情况来决定的。
snRNA参与真核细胞hnRNA的内含子的加工剪切。催化性小RNA亦为核酶。
8、核酸的紫外吸收作用
紫外吸收A260nm,单核苷酸> ssDNA > dsDNA。
DNA纯品: A260/A280 = 1.8RNA纯品: A260/A280 = 2.0
DNA的变性与复性
9、DNA变性(denaturation)是指在某些理化因素(温度、pH、离子强度等)作用下,DNA双链的互补碱基对之间的氢键断裂,解开成两条单链的现象。DNA变性的本质是双链间氢键的断裂,只改变其二级结构,不改变其核苷酸排列顺序。变性后紫外吸收增加,粘度降低,生物学功能改变或丧失,S增加。
10、/在去除变性因素,并在适当条件下,变性DNA的两条互补单链可恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性(renaturation)。
DNA的增色效应和解链温度的概念:
11、增色效应(hyperchromic effect):在DNA解链过程中,由于有更多的共轭双键得以暴露,DNA在260nm处的吸光度随之增加 。在解链过程中,紫外吸光度的变化ΔA260达到最大变化值的一半时所对应的温度称为DNA的解链温度(融解温度),又称Tm。其大小与G+C含量成正比。
核酸的分离与含量测定
12、DNA分离-0.14mol/LNaCl的溶解度最小,苯酚,三氯甲烷戊醇提取,去污剂法,酶法RNA分离纯化-主要去除蛋白质,NaCl溶解加热乙醇沉淀,去污剂法,苯酚法。